|
|
полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
количественная полимеразная цепная реакция
[греч. polymeres — состоящий из многих частей, многообразный; лат. re- — приставка, обозначающая повторность действия, и actio — действие] — вариант полимеразной цепной реакции (см. Полимеразная цепная реакция, ПЦР), при котором непрерывно регистрируется кинетика реакции, что позволяет количественно оценивать содержание определенных нуклеотидных последовательностей ДНК в сложной смеси молекул. Первый вариант этого метода был предложен П. Холландом с соавт. в 1991 г. (метод «TaqMan»). Согласно протоколу в реакционную смесь кроме обычных двух праймеров добавляют олигонуклеотидный зонд, меченный по 5'-концу флюорофором (см. Флуорохром, флуорофор) и содержащий в своей центральной или 3'-части глушитель флуоресценции, который отжигается в каждом цикле реакции с центральным участком ампликона (Ампликон (2)) между двумя амплифицирующими его праймерами. Сам зонд не используется в качестве праймера, поскольку 3'-концевая гидроксильная группа блокирована ортофосфатом. В ходе реакции термостабильная Taq-полимераза вытесняет зонд из дуплекса, а затем за счет своей 5'?3'-экзонуклеазной активности отщепляет его 5'-концевой нуклеотид, меченный флуорофором. Чем выше концентрация амплифицируемой нуклеотидной последовательности в реакционной смеси, тем меньше требуется количество циклов для того, чтобы интенсивность флуоресценции освободившегося флуорофора в пробе превысила базальный уровень свободного зонда с глушителем. С этого момента (порог числа циклов) появляется возможность наблюдать за кинетикой реального накопления флуорофора в реакционной смеси. См. также Обратная транскрипция — полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
[В. З.Тарантул. Толковый биотехнологический словарь. Русско-английский] |
|
EN |
|
|
FR |
|
|
Синонимы
- количественная полимеразная цепная реакция
EN
- real-time polymerase chain reaction
- quаntitative polymerase chain reaction
- qPCR
|
